Третья полнометражная картина франшизы «Ночь в музее» снималась под руководством режиссера Брайана Левана, а главную роль ночного сторожа Ларри Дэйли вновь исполнил Бен Стиллер. Действие разворачивается в Музее естественной истории в Нью-Йорке, где Ларри уже давно привык к необычным ночным приключениям: по залам ходят ожившие экспонаты, от доисторических животных до исторических деятелей.
После событий первой части Ларри Дэйли решает сменить работу, чтобы быть ближе к своей дочери, которая теперь живет с мамой и отчимом, и переходит на должность охранника в Смитсоновский институт — крупнейший музейный комплекс США, объединяющий десятки коллекций от естественнонаучных до исторических и художественных.
Молодой отец Ларри Дэйли, который никак не может найти стабильную работу и наладить отношения с сыном, наконец получает должность ночного сторожа в одном из старейших музеев Нью-Йорка. Кажется, что это идеальный вариант для начала — смена начинается после закрытия для посетителей, и остается только патрулировать залы, не давая проникнуть никому постороннему.